一套液相色譜系統(tǒng)大致分為五個(gè)部分：流動(dòng)相前處理部分、輸液部分、進(jìn)樣部分、分離部分和檢測(cè)部分。
一、流動(dòng)相前處理部分
流動(dòng)相前處理主要包括過(guò)濾和脫氣，使用設(shè)備主要為溶劑過(guò)濾器、真空泵和超聲波。
1.過(guò)濾。HPLC所用流動(dòng)相必須預(yù)先過(guò)濾和脫氣，過(guò)濾的作用是防止顆粒性的雜質(zhì)堵塞系統(tǒng)，或影響單向閥的正常工作。過(guò)濾時(shí)需要注意濾膜的選擇，油膜和水系膜必須分開(kāi)使用。水膜易有機(jī)溶劑溶解而進(jìn)入系統(tǒng)導(dǎo)致泵流路和色譜柱頭的堵塞。
2.超聲。超聲的作用是去除流動(dòng)相中的氣泡。超聲時(shí)間一般在20min即可。超聲后，液體溫度會(huì)升高，應(yīng)冷卻到室溫再使用。超聲后的流動(dòng)相若需隔天使用再次超聲。
二、輸液系統(tǒng)
輸液系統(tǒng)即是指高壓恒流泵，其作用是能提供穩(wěn)定準(zhǔn)確的流速。
1.溶劑過(guò)濾頭。吸液過(guò)濾頭，或稱沉子，主要作用是過(guò)濾流動(dòng)相中可能存在的顆粒性雜質(zhì)。長(zhǎng)時(shí)間使用后，雜質(zhì)有可能阻塞溶劑過(guò)濾頭上的過(guò)濾板孔隙;或長(zhǎng)時(shí)間使用緩沖液，過(guò)濾頭表面容易產(chǎn)生一層膜，阻礙流動(dòng)相正常通過(guò)。嚴(yán)重時(shí)，即使是已超聲過(guò)的溶劑，泵吸液時(shí)也會(huì)有氣泡在四氟輸液管里產(chǎn)生，因此應(yīng)經(jīng)常對(duì)過(guò)濾頭進(jìn)行清洗。清洗溶劑可以選擇乙醇或者30%稀硝酸溶液，正相系統(tǒng)需注意濾頭的烘干處理。
2.單向閥。單向閥的作用是確保液體向一個(gè)方向流動(dòng)，是高壓恒流泵穩(wěn)定輸液的保證。日常使用過(guò)程中，可以通過(guò)觀察壓力的情況，初步判斷流量是否正常。如果系統(tǒng)已經(jīng)平衡一段時(shí)間，壓力應(yīng)該是穩(wěn)定的。但如果壓力存在波動(dòng)，則表明流量不穩(wěn)定;如果無(wú)壓力，則表明無(wú)流量。這兩種情況大多是因?yàn)閱蜗蜷y里混入了氣泡或雜質(zhì)。混入氣泡的情況，應(yīng)把放空閥打開(kāi)，按沖洗鍵將里面的氣泡排出。單向閥混入雜質(zhì)的情況，須對(duì)其進(jìn)行清洗。清洗溶劑可以選擇乙醇，安裝時(shí)注意標(biāo)記環(huán)的方向。
3.密封圈。密封圈是固定在柱塞桿上防止泵腔內(nèi)的液體泄漏，是保證泵頭輸液正常的關(guān)鍵部件。但柱塞桿和柱塞密封圈長(zhǎng)期使用會(huì)發(fā)生磨損，主要與流量、操作壓力和所使用的流動(dòng)相有關(guān)。當(dāng)使用含鹽的流動(dòng)相時(shí)，由于脫水或蒸發(fā)，可能形成鹽結(jié)晶，而泵運(yùn)動(dòng)時(shí)鹽結(jié)晶會(huì)導(dǎo)致密封圈和柱塞桿的磨損。因此，每天實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)后都需用純水沖洗一次密封圈(在柱塞密封圈和二級(jí)密封圈之間)，保持清洗管內(nèi)有水以防止形成晶體，延長(zhǎng)柱塞桿和密封圈的使用壽命。
4.在線過(guò)濾器。為了防止由于流動(dòng)相雜質(zhì)微粒進(jìn)入色譜系統(tǒng)，泵在放空閥內(nèi)安裝了在線過(guò)濾器，經(jīng)泵出口流出的液體通過(guò)在線過(guò)濾器，經(jīng)排空管流出的液體不通過(guò)在線過(guò)濾器。儀器使用一定時(shí)間后，建議用戶清洗在線過(guò)濾器的燒結(jié)不銹鋼過(guò)濾片。用扳手卸下壓帽，將密封環(huán)和燒結(jié)不銹鋼過(guò)濾片一同取出清洗，清洗后按原位裝上。清洗溶劑可以選擇30%稀硝酸溶液，正相系統(tǒng)需注意濾頭的烘干處理。
三、進(jìn)樣系統(tǒng)
進(jìn)樣系統(tǒng)分為手動(dòng)進(jìn)樣閥和自動(dòng)進(jìn)樣器。
1.手動(dòng)進(jìn)樣閥。對(duì)于手動(dòng)進(jìn)樣閥使用過(guò)程中需要注意每個(gè)樣品進(jìn)樣完成后應(yīng)對(duì)進(jìn)樣閥進(jìn)行清洗，防止殘留對(duì)下一個(gè)樣品分析的影響。還需要注意進(jìn)樣方式，以20μL定量環(huán)為例，我們可以選擇完全充滿定量管或部分充滿定量管。為了保證進(jìn)樣的重復(fù)性，選擇完全充滿定量管進(jìn)樣方式時(shí)，需要注入定量環(huán)體積3倍以上的樣品;選擇部分充滿定量管進(jìn)樣方式時(shí)，進(jìn)樣體積應(yīng)在定量管體積一半以下，即1-10μL。
2.自動(dòng)進(jìn)樣器。如果采用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣，首先需要保證注射器里面沒(méi)有氣泡存在，否則影響進(jìn)樣量準(zhǔn)確性;其次是樣品瓶里面有足夠的樣品，保證進(jìn)樣針能夠吸到樣品。為了避免交叉污染需要定期對(duì)樣品瓶、蓋和墊進(jìn)行清洗。若自動(dòng)進(jìn)樣器長(zhǎng)時(shí)間不使用，應(yīng)該注意：腐蝕性的流動(dòng)相或洗液(例如，堿性或酸性緩沖溶液)必須完全從系統(tǒng)中置換出來(lái)。同時(shí)，為了避免細(xì)菌的生長(zhǎng)，應(yīng)將一個(gè)樣品瓶中充滿甲醇，并重復(fù)幾次進(jìn)樣操作。
四、分離系統(tǒng)
分離系統(tǒng)包括色譜柱、保護(hù)柱以及柱溫箱。
1.色譜柱。色譜柱是樣品分離的核心。色譜柱在使用前必須仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，了解色譜柱使用的pH值范圍、溶劑耐受范圍、壓力范圍和維護(hù)方法等事項(xiàng)。色譜柱使用完后，需及時(shí)對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗。沖洗完成后，應(yīng)該將色譜柱從儀器上拆下來(lái)，兩端用廠家配的堵頭密封后，保存在色譜柱盒里。
2.保護(hù)柱。保護(hù)柱的作用主要是防止吸附性強(qiáng)的雜質(zhì)對(duì)色譜柱污染，從而延長(zhǎng)色譜柱的壽命。針對(duì)不同型號(hào)的色譜柱，應(yīng)選擇相對(duì)應(yīng)填料的保護(hù)柱。應(yīng)注意柱芯也是有壽命的，應(yīng)該定期進(jìn)行更換。
3.柱溫箱。色譜柱溫度變化，可能會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間的變化。為了避免這個(gè)問(wèn)題，建議使用柱溫箱。
五、檢測(cè)系統(tǒng)
HPLC常用的檢測(cè)器是紫外檢測(cè)器。在日常使用過(guò)程中紫外檢測(cè)器主要需要注意檢測(cè)池和氘燈的使用與維護(hù)。
1.檢測(cè)池。檢測(cè)池長(zhǎng)時(shí)間使用可能會(huì)造成污染，如果儀器的參比能量(REF ENERGY)正常，測(cè)量能量(SMPENERGY)偏低，可能為檢測(cè)池污染導(dǎo)致，可以對(duì)檢測(cè)池進(jìn)行清洗。對(duì)檢測(cè)池零件的進(jìn)行清洗，一般先采用約1：4的硝酸溶液超聲清洗，分別用純水和甲醇溶液清洗，然后重新組裝并將檢測(cè)池池體推進(jìn)池腔內(nèi)，擰緊池板螺絲。注意組裝中，池玻璃及墊片一定要放正，以免壓碎池玻璃，造成檢測(cè)池泄漏。
2.氘燈。氘燈正常使用壽命可在1500小時(shí)以上。燈的使用壽命與檢測(cè)器的使用時(shí)間和開(kāi)啟頻率有關(guān)，因此使用過(guò)程中應(yīng)盡量節(jié)省不必要的開(kāi)機(jī)時(shí)間，減少開(kāi)關(guān)頻率，以延長(zhǎng)氘燈的使用壽命。如果準(zhǔn)確地判斷出氘燈已經(jīng)不能點(diǎn)亮或能量太低，則需要更換新的氘燈。在購(gòu)買(mǎi)氘燈時(shí)，應(yīng)注意咨詢和核對(duì)氘燈的型號(hào)與儀器型號(hào)是否匹配。更換到氘燈時(shí)，參照儀器說(shuō)明書(shū)中的相關(guān)內(nèi)容，特別要注意氘燈連接線的位置順序。
